原标题：决明子蛋白质和蒽醌衰老小鼠学习记忆及代谢产物的影响
决明子蛋白和蒽醌苷对D2半乳糖衰老小鼠学习记忆及代谢产物的影响及蒽醌苷对D2半乳糖诱导的衰老小鼠学习记忆及相关酶类和代谢产物的影响。方法：选用长期皮下注射D2半乳糖形成的衰老小鼠模型。结果：三等分径向迷宫（即Y2迷宫）和一次性被动回避试验证实，决明子蛋白和蒽醌苷对衰老小鼠的学习记忆障碍有显着改善作用；决明子蛋白和蒽醌甙可显着降低衰老小鼠脑组织中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量，提高脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）的水平，降低肝组织中脂褐素（LF）的含量。决明子蛋白仍能显着降低衰老小鼠脑组织中单胺氧化酶（MAO）的含量。结论：决明子蛋白和蒽醌甙具有抗衰老和促进学习记忆能力的作用。[关键词] 决明子；蛋白质; 蒽醌甙；抗衰老李雪，电话：(020)85211420，邮箱：lixue@sc2nu。教育。cn Cassia为豆科植物Cassia obtusifolia L.或C.tora的干燥成熟种子。决明子蛋白和蒽醌甙具有抗衰老和促进学习记忆能力的作用。[关键词] 决明子；蛋白质; 蒽醌甙；抗衰老李雪，电话：(020)85211420，邮箱：lixue@sc2nu。教育。cn Cassia为豆科植物Cassia obtusifolia L.或C.tora的干燥成熟种子。决明子蛋白和蒽醌甙具有抗衰老和促进学习记忆能力的作用。[关键词] 决明子；蛋白质; 蒽醌甙；抗衰老李雪，电话：(020)85211420，邮箱：lixue@sc2nu。教育。cn Cassia为豆科植物Cassia obtusifolia L.或C.tora的干燥成熟种子。
具有清热明目、润肠通便等功效。决明子蛋白和蒽醌甙可显着降低高血脂大鼠升高的甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、全血粘度、血浆粘度和血小板粘附率[1]; 决明子蛋白和蒽醌甙能显着降低实验性高血压大鼠的血压，而且决明子蒽醌甙具有优良的降压强度和持续时间[2]。本研究以实验性衰老小鼠模型为对象，研究决明子蛋白和蒽醌苷对复方利血平老化的D2半乳糖衰老小鼠学习记忆和代谢产物的影响。1 材料 1.1 动物 SPF级昆明种小鼠，雌性，称重（20±2）g，由广州中医药大学实验动物中心提供，证号STXK（粤）200320001。 1.2 药物和??试剂决明为豆科植物决明的干燥成熟种子经鉴定广东药学院药用植物教研室 决明子蛋白（PSC）：脱脂决明子粉，低温提取缓冲液（NaH2PO4/NaOH，0.1-05 mol·L，硫酸铵分级沉淀，离心（10,000 r·min·min，7℃）收集40%至55%硫酸铵饱和沉淀的蛋白用双蒸水透析48h（平均6h换水一次），离心（条件同前），上清液过Sephadex G 75柱， ob2-1, pH 810) - 1,
决明子蒽醌苷（ASC）：用90%热乙醇提取总蒽醌，再用氯仿提取游离蒽醌，用蒽醌苷与Pb在一定pH值下沉淀分离，经H2S脱铅，重结晶，备用（蒽醌苷含量941.7%)。丙二醛（MDA）试剂盒，批号20041108；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒，批号20041111；单胺氧化酶 (MAO) 试剂盒，批号 20041115；脂褐素 (LF) 试剂盒，批号 20041115；是南京建成生物工程研究所的产品。维生素E(VE)胶囊(广州兴群药业有限公司，批号BE50012)；D2半乳糖（广州维佳科技有限公司，批号2614B19）。1.3 仪器 MG-2三等分辐射迷宫（三星声电公司，江苏省沙州县），一次性被动回避反应箱（华南师范大学，广州）。2 方法 2.1 分组与给药 80只小鼠随机分为8组，每组10只。第一组为空白组，第二组为模型组，第三组为阳性组（VE，900 mg·kg，决明子蛋白高、低剂量组（1、01 25 mg·kg· d（20、5 mg·kg蒽醌苷混合给药组（蛋白01 25 mg·kg蒽醌苷5 mg·kg2+形成的复合物-1·d-1），第四和第五组份-1-1）， 6组和7组为决明子蒽醌苷高、低剂量组-1·d-1)，8组为决明子蛋白和-1·d-1,-1·d-1)。一次性被动回避反应盒（华南师范大学，广州）。2 方法 2.1 分组与给药 80只小鼠随机分为8组，每组10只。第一组为空白组，第二组为模型组，第三组为阳性组（VE，900 mg·kg，决明子蛋白高、低剂量组（1、01 25 mg·kg· d（20、5 mg·kg蒽醌苷混合给药组（蛋白01 25 mg·kg蒽醌苷5 mg·kg2+形成的复合物-1·d-1），第四和第五组份-1-1）， 6组和7组为决明子蒽醌苷高、低剂量组-1·d-1)，8组为决明子蛋白和-1·d-1,-1·d-1)。一次性被动回避反应盒（华南师范大学，广州）。2 方法 2.1 分组与给药 80只小鼠随机分为8组，每组10只。第一组为空白组，第二组为模型组，第三组为阳性组（VE，900 mg·kg，决明子蛋白高、低剂量组（1、01 25 mg·kg· d（20、5 mg·kg蒽醌苷混合给药组（蛋白01 25 mg·kg蒽醌苷5 mg·kg2+形成的复合物-1·d-1），第四和第五组份-1-1）， 6组和7组为决明子蒽醌苷高、低剂量组-1·d-1)，8组为决明子蛋白和-1·d-1,-1·d-1)。每组10个。第一组为空白组，第二组为模型组，第三组为阳性组（VE，900 mg·kg，决明子蛋白高、低剂量组（1、01 25 mg·kg· d（20、5 mg·kg蒽醌苷混合给药组（蛋白01 25 mg·kg蒽醌苷5 mg·kg2+形成的复合物-1·d-1），第四和第五组份-1-1）， 6组和7组为决明子蒽醌苷高、低剂量组-1·d-1)，8组为决明子蛋白和-1·d-1,-1·d-1)。每组10个。第一组为空白组，第二组为模型组，第三组为阳性组（VE，900 mg·kg，决明子蛋白高、低剂量组（1、01 25 mg·kg· d（20、5 mg·kg蒽醌苷混合给药组（蛋白01 25 mg·kg蒽醌苷5 mg·kg2+形成的复合物-1·d-1），第四和第五组份-1-1）， 6组和7组为决明子蒽醌苷高、低剂量组-1·d-1)，8组为决明子蛋白和-1·d-1,-1·d-1)。
?615?32卷第6期2007年3月中国中药杂志Vol. 32, Issue6M edica, 2007 空白组小鼠每天皮下注射生理盐水01 5 mL，其余各组小鼠每天皮下注射5% D2半乳糖生理盐水01 5 mL。同时各组小鼠每天ig 1次上述药物(空白组和模型组ig 0.15 mL生理盐水)，连续7周。实验结束后两天，用MG22三等分径向迷宫和一次性被动回避反应箱法测试学习率和记忆能力。试验完成后处死小鼠，称重体重、肝脏、胸腺、脾脏和脑，计算脏器系数。然后分别取脑和肝组织，将 1 g 组织加入 9 mL 生理盐水中制成均质样品。实验结束时，取脑匀浆液样品，按试剂盒法测定SOD、MDA和MAO的含量；取肝匀浆样品，按照试剂盒方法测定LF含量。2.2 统计分析数据以X±s表示，统计处理采用组间t检验。3 结果 3.1 对衰老小鼠体征的影响 与空白组相比，模型组小鼠毛发枯萎无光泽，精神萎靡，摄食量少，体型改变 表1 D2半乳糖衰老小鼠对学习率的影响记忆力受影响（x±s，n=10）变瘦，大便干少。实验结束时，取脑匀浆液样品，按试剂盒法测定SOD、MDA和MAO的含量；取肝匀浆样品，按照试剂盒方法测定LF含量。2.2 统计分析数据以X±s表示，统计处理采用组间t检验。3 结果 3.1 对衰老小鼠体征的影响 与空白组相比，模型组小鼠毛发枯萎无光泽，精神萎靡，摄食量少，体型改变 表1 D2半乳糖衰老小鼠对学习率的影响记忆力受影响（x±s，n=10）变瘦决明子脂肪蛋白质，大便干少。实验结束时，取脑匀浆液样品，按试剂盒法测定SOD、MDA和MAO的含量；取肝匀浆样品，按照试剂盒方法测定LF含量。2.2 统计分析数据以X±s表示，统计处理采用组间t检验。3 结果 3.1 对衰老小鼠体征的影响 与空白组相比，模型组小鼠毛发枯萎无光泽，精神萎靡，摄食量少，体型改变 表1 D2半乳糖衰老小鼠对学习率的影响记忆力受影响（x±s，n=10）变瘦，大便干少。按照试剂盒方法测定LF含量。2.2 统计分析数据以X±s表示，统计处理采用组间t检验。3 结果 3.1 对衰老小鼠体征的影响 与空白组相比，模型组小鼠毛发枯萎无光泽，精神萎靡，摄食量少，体型改变 表1 D2半乳糖衰老小鼠对学习率的影响记忆力受影响（x±s，n=10）变瘦，大便干少。按照试剂盒方法测定LF含量。2.2 统计分析数据以X±s表示，统计处理采用组间t检验。3 结果 3.1 对衰老小鼠体征的影响 与空白组相比，模型组小鼠毛发枯萎无光泽，精神萎靡，摄食量少，体型改变 表1 D2半乳糖衰老小鼠对学习率的影响记忆力受影响（x±s，n=10）变瘦，大便干少。
这些现象与衰老小鼠的特征是一致的。与模型组相比，各治疗组小鼠毛发洁白光滑，大便更软；其中蒽醌高、低剂量组和蛋白与蒽醌混合给药组小鼠进食量较大；蛋白质高、低剂量对照组、蛋白质与蒽醌苷混合给药组小鼠大便量增多，脾气暴躁。3.2 对衰老小鼠学习速度和记忆能力的影响模型组第一天和第二天的正确反应率明显低于空白组。VE可以显着提高衰老小鼠的正确反应率。高剂量蛋白组和高剂量蒽醌苷组能显着提高衰老小鼠的正确反应率，且这两组在第二天的正确反应率明显高于第一天。在低剂量蛋白质组、低剂量蒽醌苷组、混合蛋白质和蒽醌苷组中，衰老小鼠的正确反应率没有明显提高。与空白组相比决明子脂肪蛋白质，衰老模型组小鼠进入洞穴所需的时间（潜伏期、迟发性）明显减少。VE可以显着延长衰老小鼠的潜伏期。给药后，各组小鼠进入洞穴所需时间（潜伏期）明显延长（表1）。组剂量/mg·kg- 1 第一天正确反应率/% 第二天正确反应率/% Latency/s Control-701 0 ±231 3461 7 ±201 51)681 3 ±241 22)681 3 ± 121 32)631 3 ±171 2681 3 ±141 62)631 3 ±151 3651 0 ±211 4751 5 ±181 0551 0 ±191 31)711 7 ±151 82)731 3 ±171 92)751 0 ±181 02)761 7 ±161 12)661 7 ±111 1681 3 ±211 42391 9 ±841 11411 3 ±1111 31)2361 7 ±841 42)2481 4 ±901 42)2361 3 ±821 72)2561 0 ±831 03)2381 82) 2361 9 ±891 12) 型号VE-900PSC1ASC01 2520PSC +ASC501 25 +5 注：与对照组比较 1) P <01 05; 与模型组相比 2) P < 01 053。
它表明，衰老小鼠的肝脏、大脑和免疫器官都萎缩了。维生素E能显着提高衰老小鼠的肝脏系数和胸腺系数，显着提高衰老小鼠的脑系数。决明子蒽醌苷能显着或极显着提高衰老小鼠的上述脏器系数。决明子蛋白可显着或极显着提高衰老小鼠的脑系数、胸腺系数和肝脏系数（表2）。3.4 对衰老小鼠脑组织SOD、MAO、MDA、LF含量的影响与空白组相比，模型组小鼠脑组织SOD含量明显降低，MAO明显升高，脑组织中的MDA和肝组织中的LF显着升高。LF含量均显着增加。VE能显着增加老龄小鼠脑组织中的SOD，极显着降低老龄小鼠脑组织中MAO和MDA的含量，极显着降低老龄小鼠肝组织中LF的含量。给药后，除蛋白质和蒽醌苷混合组外，各组衰老小鼠SOD活性均有极显着升高。大蛋白低剂量组仍能显着降低衰老小鼠脑组织中MAO含量。高剂量蛋白组和低剂量蒽醌苷组可显着降低衰老小鼠脑组织中MDA含量。各组衰老小鼠肝组织中LF含量均显着降低（表3）。
决明子蛋白仍能降低衰老小鼠脑组织中的MAO含量。说明决明子蛋白和蒽醌甙具有抗衰老作用。但决明子蛋白与蒽醌苷小剂量组合并无抗衰老协同作用。决明子蛋白和蒽醌苷具有降血压、降血脂的作用[1]。实验研究表明，血清SOD、MDA等水平的变化。·715·第32卷2007年3月6日中国中药杂志Vol. 32, Issue 6 March, 2007 Table 2 has little effect on D2 galactose aging Effects of Rat 器官系数 (x ±s, n =10) 组剂量/mg?kg- 1 肝系数/mg?g- 1 脑系数/mg?g- 1 脾脏系数/mg?g- 1 胸腺系数/mg?g- 1 对照-511 7 ±41 6411 5 ±21 52)551 6 ±51 34)471 1 ±31 84)461 9 ±31 34)481 0 ±31 24)461 2 ±41 44)441 5 ±31 53)101 00 ±01 9191 06 ±01 961)91 98 ±01 803)91 42 ±01 7891 98 ±01 833)91 44 ±01 91101 15 ±01 684)91 73 ±01 9641 56 3 ±01 8 76 ±01 721)41 24 ±01 7341 19 ± 01 8631 99 ±01 9941 58 ±01 793)41 66 ±01 554)41 93 ±01 854)21 16 ±01 2711 58 ±01 422)21 15 4 ±01 4 ) 11 98 ±01 5021 23 ±01 524) 21 02 ±01 463) 21 12 ±01 374) 21 12 ±01 374) Model VE-900PSC1ASC01 2520PSC +ASC501 25 +5 注：与对照组相比1) P <01 05, 2) P < 01 01; 与模型组相比 3) P < 01 05,
超氧化物增加细胞膜对钙离子的特定通透性，减少肌浆网对钙离子的吸收，从而使细胞内钙离子过载 [5]。因此，决明子蛋白和蒽醌甙也可能通过调节组织中SOD和MDA的含量而起到降血脂和降血压的作用。临床研究表明，决明子具有降血脂、降血压、提高免疫力、预防老年性白内障、治疗中老年人便秘等作用[6]。决明子蛋白和蒽醌甙是决明子的重要成分，其抗衰老作用可能是临床治疗老年相关疾病的重要依据之一。需要进一步研究的工作是进一步分离纯化决明子的蛋白质和蒽醌苷，探索其单一成分的抗衰老作用。对具有抗衰老作用、毒副作用较大的化合物进行衍生和转化，最终获得疗效确切、毒副作用小的新型抗衰老药物。[参考文献][1]李雪娥，郭宝江．决明子蛋白和蒽醌甙对高脂血症大鼠血脂的影响[J]. 中国中医药杂志, 2002, 27(5): 374.[2] 纪淑兰，徐慧敏，王玉萍，等。高血压患者血清SOD、LPO、GSH2PX水平变化及其临床意义[J]. 放射免疫学杂志, 2004, 17(4): 261.[3] 范德义、刘克强、张爱林。高血压患者过氧化损伤与血清一氧化氮水平分析[J]. 心血管病临床杂志，2003，19(8)：479． [4]陈星，王成章．老年冠心病患者血脂与血脂过氧化的关系[J]. 中国动脉硬化杂志, 1996, 4(1): 58.[5] 王志斌。脂质过氧化与高血压关系的研究进展[J]. 泸州医学院学报, 2001, 24(4): 350. [ 6 ] 白树芳,李树平．中药决明子治疗便秘30例[J]．武警医学院学报, 2000, 9(3): 287. 王成章。老年冠心病患者血脂与血脂过氧化的关系[J]. 中国动脉硬化杂志, 1996, 4(1): 58.[5] 王志斌。脂质过氧化与高血压关系的研究进展[J]. 泸州医学院学报, 2001, 24(4): 350. [ 6 ] 白树芳,李树平．中药决明子治疗便秘30例[J]．武警医学院学报, 2000, 9(3): 287. 王成章。老年冠心病患者血脂与血脂过氧化的关系[J]. 中国动脉硬化杂志, 1996, 4(1): 58.[5] 王志斌。脂质过氧化与高血压关系的研究进展[J]. 泸州医学院学报, 2001, 24(4): 350. [ 6 ] 白树芳,李树平．中药决明子治疗便秘30例[J]．武警医学院学报, 2000, 9(3): 287. 中药决明子治疗便秘30例[J]．武警医学院学报, 2000, 9(3): 287. 中药决明子治疗便秘30例[J]．武警医学院学报, 2000, 9(3): 287.